तुमच्या ब्राउझरमध्ये जावास्क्रिप्ट सध्या अक्षम आहे. जावास्क्रिप्ट अक्षम असताना या वेबसाइटची काही वैशिष्ट्ये काम करणार नाहीत.
तुमच्या विशिष्ट तपशिलांसह आणि तुम्हाला स्वारस्य असलेल्या विशिष्ट औषधासह नोंदणी करा. तुम्ही दिलेल्या माहितीची आमच्या विस्तृत डेटाबेसमधील लेखांशी जुळवणी करून आम्ही तुम्हाला त्वरित एक PDF प्रत ईमेल करू.
बॅन-लॅन-जेन ग्रॅन्युल्स आतड्यातील सूक्ष्मजीवांचे नियमन करून आणि आतड्यातील SCFA पासून तयार होणाऱ्या GLP-1 चे उत्पादन पुनर्संचयित करून, उंदरांमध्ये डेक्स्ट्रान सोडियम सल्फेटमुळे होणाऱ्या क्रॉनिक रिलॅप्सिंग कोलायटिसची तीव्रता कमी करतात.
जिओ पेंग,1-3,*ली शी,4,*झेंग लिन,3,5 डुआन लिफांग,1 गाओ झेंगझियान,2,5 डिएहू,1 ली जी,6 ली झियाओफेंग,6 शेन झियांगचुन,5 झियाओ हैताओ21पेकिंग युनिव्हर्सिटी शेन्झेन हॉस्पिटल डिपार्टमेंट ऑफ फार्मसी, शेन्झेन, पीपल्स रिपब्लिक ऑफ चायना; 2शेन्झेन युनिव्हर्सिटी हेल्थ सायन्स सेंटर स्कूल ऑफ फार्मसी, शेन्झेन, पीपल्स रिपब्लिक ऑफ चायना; 3गुइझोउ मेडिकल युनिव्हर्सिटी इंजिनिअरिंग टेक्नॉलॉजी रिसर्च सेंटर ऑफ एथनिक मेडिसिन अँड ट्रॅडिशनल चायनीज मेडिसिन डेव्हलपमेंट अँड ॲप्लिकेशन मिनिस्ट्री ऑफ एज्युकेशन, गुइझोउ प्रोव्हिन्शियल की लॅबोरेटरी ऑफ फार्मसी, गुइझोउ मेडिकल युनिव्हर्सिटी, गुइयांग, पीपल्स रिपब्लिक ऑफ चायना; 4 डिपार्टमेंट ऑफ गॅस्ट्रोएन्टेरोलॉजी, पेकिंग युनिव्हर्सिटी शेन्झेन हॉस्पिटल, शेन्झेन, पीपल्स रिपब्लिक ऑफ चायना; 5 स्कूल ऑफ फार्मसी, गुइझोउ मेडिकल युनिव्हर्सिटी, स्टेट की लॅबोरेटरी ऑफ मेडिसिनल प्लांट फंक्शन अँड ॲप्लिकेशन, गुइयांग; ६ प्रयोगशाळा औषध विभाग, पेकिंग युनिव्हर्सिटी शेन्झेन हॉस्पिटल, शेन्झेन, चीन [email protected] शेन शियांगचुन, स्कूल ऑफ फार्मसी, गुइझोउ मेडिकल युनिव्हर्सिटी, गुइझोउ, पीपल्स रिपब्लिक ऑफ चायना, ५५०००४, ईमेल [email protected] उद्देश: GLP-1-आधारित उपचारपद्धती हा दाहक आतड्यांच्या आजारासाठी एक नवीन उपचार पर्याय आहे. बान-लान-जेन (BLG) ग्रॅन्युल्स हे एक ज्ञात विषाणू-विरोधी पारंपारिक चीनी औषध (TCM) फॉर्म्युलेशन आहे, जे विविध दाहक परिस्थितींच्या उपचारांमध्ये संभाव्य दाह-विरोधी क्रिया दर्शवते. तथापि, कोलायटिसवरील त्याचा दाह-विरोधी प्रभाव आणि त्याच्या कार्याची यंत्रणा अजूनही अस्पष्ट आहे. पद्धती: उंदरांमध्ये डेक्स्ट्रान सोडियम सल्फेट (DSS)-प्रेरित क्रॉनिक रिलॅप्सिंग कोलायटिस स्थापित करणे. BLG च्या संरक्षणात्मक प्रभावाचे मूल्यांकन करण्यासाठी रोग क्रियाकलाप निर्देशांक, इजाचे हिस्टोलॉजिकल मार्कर आणि प्रोइन्फ्लेमेटरी सायटोकाइन पातळी तपासण्यात आल्या. BLG चे आतड्यांतील सूक्ष्मजीव आणि आतड्यांवरील परिणाम सीरम GLP-1 पातळी आणि कोलोनिक Gcg, GPR41, आणि GRP43 अभिव्यक्ती, आतड्यातील सूक्ष्मजीवांची रचना, विष्ठेतील SCFAs ची पातळी, आणि प्राथमिक माऊस कोलोनिक एपिथेलियल पेशींमधून GLP-1 चे उत्सर्जन, SCFA-व्युत्पन्न GLP-1 उत्पादन. परिणाम: BLG उपचाराने शरीराचे वजन घटणे, DAI, मोठ्या आतड्याचे लहान होणे, मोठ्या आतड्याच्या ऊतींचे नुकसान, आणि मोठ्या आतड्याच्या ऊतींमधील TNF-α, IL-1β, आणि IL-6 यांसारख्या दाहक सायटोकाइन्सची पातळी लक्षणीयरीत्या कमी केली. याव्यतिरिक्त, BLG उपचार कोलायटिस झालेल्या उंदरांमध्ये मोठ्या आतड्यातील Gcg, GPR41 आणि GRP43 अभिव्यक्ती आणि रक्तातील GLP-1 ची पातळी लक्षणीयरीत्या पूर्ववत करू शकतो, आणि Akkermansia व Prevotellaceae_UCG-001 सारख्या SCFA-उत्पादक जीवाणूंची संख्या वाढवून, तसेच Eubacterium_xylanophilum_group, Ruminococcaceae_UCG-014, Intestinimonas आणि Oscillibacter सारख्या जीवाणूंची संख्या कमी करून हे साध्य होते. याव्यतिरिक्त, BLG उपचार कोलायटिस झालेल्या उंदरांच्या विष्ठेतील SCFAs ची पातळी लक्षणीयरीत्या वाढवू शकतो. त्याच वेळी, इन विट्रो प्रयोगांमध्ये असेही दिसून आले की बीएलजी-उपचारित उंदरांच्या विष्ठेचा अर्क, उंदरांच्या लहान मोठ्या आतड्यातील प्राथमिक उपकला पेशींना जीएलपी-१ स्रवण्यासाठी मोठ्या प्रमाणात उत्तेजित करू शकतो. निष्कर्ष: हे निष्कर्ष सूचित करतात की बीएलजीमध्ये कोलायटिस-विरोधी प्रभाव आहे. आतड्यातील सूक्ष्मजीवांचे नियमन करून आणि आतड्यातील एससीएफए-व्युत्पन्न जीएलपी-१ उत्पादन पुनर्संचयित करून, बीएलजीला एक उपचार म्हणून विकसित करण्याची क्षमता आहे. जुनाट पुनरावर्ती कोलायटिससाठी एक आशादायक औषध. कीवर्ड: कोलायटिस, बॅन-लॅन-जेन ग्रॅन्युल्स, आतड्यातील सूक्ष्मजीव, शॉर्ट-चेन फॅटी ऍसिडस्, जीएलपी-१
अल्सरेटिव्ह कोलायटिस (UC) हा मोठ्या आतड्याचा आणि गुदाशयाचा एक दीर्घकालीन दाहक रोग आहे, ज्याची लक्षणे म्हणजे वारंवार होणारा अतिसार, पोटदुखी, वजन कमी होणे आणि पूमिश्रित रक्तमिश्रित शौच होणे.¹ अलीकडे, पाश्चात्य जीवनशैलीच्या वाढत्या लोकप्रियतेमुळे, चीनसह पूर्वी कमी प्रादुर्भाव असलेल्या देशांमध्ये UC चा प्रादुर्भाव वाढत आहे.² या वाढीमुळे सार्वजनिक आरोग्यासाठी मोठ्या समस्या निर्माण झाल्या आहेत आणि रुग्णांच्या काम करण्याच्या क्षमतेवर व जीवनाच्या गुणवत्तेवर याचे गंभीर परिणाम होतात. विशेषतः, UC ची रोगनिर्मिती प्रक्रिया मोठ्या प्रमाणात अस्पष्ट आहे, परंतु हे सर्वसाधारणपणे मान्य आहे की आनुवंशिकता, पर्यावरणीय घटक, आतड्यातील सूक्ष्मजीव आणि रोगप्रतिकार प्रणाली हे सर्व UC च्या विकासात योगदान देतात.³ आजही, UC वर कोणताही इलाज नाही आणि उपचारांचे उद्दिष्ट वैद्यकीयदृष्ट्या क्लिनिकल लक्षणांवर नियंत्रण ठेवणे, रोगाची लक्षणे कमी करणे आणि ती टिकवून ठेवणे, आतड्याच्या आतील आवरणाच्या दुरुस्तीस प्रोत्साहन देणे आणि रोगाचा पुन्हा उद्भवणे कमी करणे हे आहे. पारंपारिक उपचारांमध्ये एमिनोसॅलिसिलेट्स, कॉर्टिकोस्टिरॉइड्स, इम्युनोसप्रेसंट्स आणि बायोलॉजिक्स यांचा समावेश होतो. तथापि, ही औषधे त्यांच्या विशिष्ट मर्यादांमुळे अपेक्षित परिणाम साधू शकत नाहीत. विविध दुष्परिणाम.४ अलीकडे, अनेक केस स्टडीजमधून असे दिसून आले आहे की पारंपरिक चिनी औषध (TCM) कमी विषारीपणासह UC पासून आराम देण्यास मदत करण्यासाठी मोठी क्षमता दर्शवते, जे सूचित करते की नवीन TCM उपचार पद्धतींचा विकास ही UC साठी एक आशादायक उपचार रणनीती आहे.५-७
बानलांगेन ग्रॅन्युल्स (BLG) हे बानलांगेन मुळाच्या जलीय अर्कापासून बनवलेले एक पारंपरिक चीनी औषध आहे.⁸ त्याच्या विषाणूविरोधी प्रभावीतेव्यतिरिक्त, BLG विविध दाहक स्थितींच्या उपचारांमध्ये संभाव्य दाह-विरोधी क्रिया दर्शवते.⁹,¹⁰ याव्यतिरिक्त, ग्लुकोसिनोलेट्स (R,S-गोइट्रिन, प्रोगोइट्रिन, एपिप्रोरुबिन आणि ग्लुकोसाइड हे रॅडिक्स इसॅटिडिसच्या जलीय अर्कांमधून वेगळे करून ओळखले गेले आहेत) आणि न्यूक्लियोसाइड्स (हायपोझॅन्थिन, ॲडेनोसिन, युरिडिन आणि ग्वानोसिन) आणि इंडिगो व इंडिरुबिन सारखे इंडिगो अल्कलॉइड्स.¹¹,¹² मागील अभ्यासांमध्ये हे चांगल्या प्रकारे नोंदवले गेले आहे की ॲडेनोसिन, युरिडिन आणि इंडिरुबिन ही संयुगे कोलायटिसच्या विविध प्राणी मॉडेल्समध्ये प्रभावी कोलायटिस-विरोधी प्रभाव दर्शवतात.¹³⁻¹⁷ तथापि, कोलायटिसमध्ये BLG च्या प्रभावीतेचे मूल्यांकन करण्यासाठी कोणतेही पुरावा-आधारित अभ्यास केले गेले नाहीत. प्रस्तुत अभ्यासात, आम्ही डेक्स्ट्रान सोडियमवर BLG च्या संरक्षणात्मक प्रभावाचा अभ्यास केला. C57BL/6 उंदरांमध्ये सल्फेट (DSS)-प्रेरित क्रॉनिक रिलॅप्सिंग कोलायटिसचा अभ्यास केला आणि असे आढळून आले की BLG चे तोंडी सेवन केल्याने उंदरांमध्ये DSS-प्रेरित क्रॉनिक रिलॅप्सिंग कोलन दाह लक्षणीयरीत्या कमी होतो, त्याच्या नियामक यंत्रणा आतड्यांतील सूक्ष्मजीवांच्या नियमनाशी आणि आतड्यांमधून निर्माण होणाऱ्या ग्लुकागॉन-लाइक पेप्टाइड-1 (GLP-1) च्या उत्पादनाच्या पुनर्संचयनाशी संबंधित आहेत.
बीएलजी ग्रॅन्युल्स (साखर-मुक्त, एनएमपीए-मान्यताप्राप्त Z11020357; बीजिंग टोंगरेनटांग टेक्नॉलॉजी डेव्हलपमेंट कं., लि., बीजिंग, चीन; बॅच क्रमांक: 20110966) फार्मसीमधून खरेदी करण्यात आले. डीएसएस (आण्विक वजन: ३६,०००–५०,००० डाल्टन) एमपी बायोलॉजिकल्स (सांता आना, यूएसए) कडून खरेदी करण्यात आले. सल्फासालाझिन (एसएएसपी) (≥ ९८% शुद्धता), हेमेटोक्सिलिन आणि इओसिन सिग्मा-अल्ड्रिच (सेंट लुईस, एमओ, यूएसए) कडून खरेदी करण्यात आले. माऊस टीएनएफ-α, आयएल-१β आणि आयएल-६ ल्युमिनेक्स एलिसा असे किट्स आर अँड डी सिस्टीम्स (मिनियापोलिस, एमएन, यूएसए) कडून खरेदी करण्यात आले. ॲसेटिक ॲसिड, प्रोपिओनिक ॲसिड आणि ब्युटीरिक ॲसिड अलादीन इंडस्ट्रीज (शांघाय, चीन) कडून खरेदी करण्यात आले. २-इथाइलब्युटीरिक ॲसिड मर्क केजीएए कडून खरेदी करण्यात आले. (डार्मस्टाट, जर्मनी).
६-८ आठवड्यांचे नर C57BL/6 उंदीर (शरीराचे वजन १८-२२ ग्रॅम) बीजिंग वेटाहे लॅबोरेटरी ॲनिमल टेक्नॉलॉजी कं, लि. (बीजिंग, चीन) येथून खरेदी करण्यात आले आणि त्यांना २२ ± २ °C तापमानाच्या वातावरणात १२ तासांच्या प्रकाश/अंधार चक्रात ठेवण्यात आले. नवीन वातावरणाशी जुळवून घेण्यासाठी उंदरांना एक आठवडाभर पिण्याच्या पाण्यासह प्रमाणित रोडेंट आहार देण्यात आला. त्यानंतर उंदरांना चार गटांमध्ये यादृच्छिकपणे विभागण्यात आले: नियंत्रण गट, DSS मॉडेल गट, SASP-उपचारित गट (२०० मिग्रॅ/किलो, तोंडी) आणि BLG-उपचारित गट (१ ग्रॅम/किलो, तोंडी). आकृती १A मध्ये दर्शविल्याप्रमाणे, आमच्या मागील अभ्यासानुसार, उंदरांमध्ये प्रायोगिक क्रॉनिक रिलॅप्सिंग कोलायटिस प्रेरित करण्यासाठी ५ दिवसांसाठी १.८% DSS ची तीन चक्रे आणि त्यानंतर ७ दिवसांसाठी डिस्टिल्ड वॉटर देण्यात आले.18 SASP आणि BLG उपचारित गटांतील उंदरांना अनुक्रमे SASP आणि BLG ने दिवसापासून दररोज उपचारित करण्यात आले. प्राथमिक प्रयोगांनुसार, BLG चा डोस 1 g/kg निश्चित करण्यात आला. तर, साहित्य संदर्भानुसार SASP चा डोस 200 mg/Kg निश्चित करण्यात आला.⁴ नियंत्रण आणि DSS मॉडेल गटांना संपूर्ण प्रयोगादरम्यान समान प्रमाणात पाणी देण्यात आले.
आकृती १ बीएलजी (BLG) उंदरांमधील डीएसएस-प्रेरित (DSS-induced) क्रॉनिक रिलॅप्सिंग कोलायटिसमध्ये सुधारणा करते. (अ) क्रॉनिक रिकरंट कोलायटिसची प्रायोगिक रचना आणि उपचार, (ब) शरीराच्या वजनातील बदल, (क) डिसीज ॲक्टिव्हिटी इंडेक्स (DAI) स्कोअर, (ड) कोलनची लांबी, (इ) कोलनची प्रातिनिधिक प्रतिमा, (फ) एच अँड ई स्टेनिंग (H&E staining) कोलन (विस्तार, ×100) आणि (ग) हिस्टोलॉजिकल स्कोअर. डेटा सरासरी ± एसईएम (n = 6) म्हणून सादर केला आहे. ##p < 0.01 किंवा ###p < 0.001 विरुद्ध कंट्रोल (Con) गट; *p < 0.05 किंवा **p < 0.01 किंवा ***p < 0.001 विरुद्ध डीएसएस (DSS) गट.
शरीराचे वजन, विष्ठेची सुसंगतता आणि गुदद्वारातून होणारा रक्तस्त्राव यांची दररोज नोंद केली गेली. पूर्वी वर्णन केल्याप्रमाणे शरीराचे वजन, विष्ठेची सुसंगतता आणि गुदद्वारातून होणारा रक्तस्त्राव यांच्या गुणांना एकत्र करून रोग क्रियाकलाप निर्देशांक (DAI) निश्चित करण्यात आला.¹⁹ प्रयोगाच्या शेवटी, सर्व उंदरांना वेदनामुक्त मृत्यू देण्यात आला आणि पुढील प्रयोगांसाठी रक्त, विष्ठा आणि मोठे आतडे गोळा करण्यात आले.
कोलन ऊती फॉर्मेलिनमध्ये स्थिर करून पॅराफिनमध्ये एम्बेड करण्यात आली. ५-मायक्रॉनचे सेक्शन बनवून त्यांना हेमॅटोक्सिलिन-इओसिन (H&E) ने रंगवले गेले, त्यानंतर पूर्वी वर्णन केल्याप्रमाणे¹⁹ ब्लाइंडिंग करून स्कोअरिंग करण्यात आले.
कोलन ऊतीमधील एकूण आरएनए ट्रायझोल रिएजंट (इन्व्हिट्रोजन, कार्ल्सबॅड, सीए) वापरून काढण्यात आला, त्यानंतर रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेज (टाकारा, कुसात्सु, शिगा, जपान) वापरून सीडीएनए काढण्यात आला. एसवायबीआर ग्रीन मास्टर (रोश, बासेल, स्वित्झर्लंड) असलेल्या रिअल-टाइम पीसीआर प्रणालीचा वापर करून क्वांटिटेटिव्ह पीसीआर करण्यात आला. लक्ष्य जीन ट्रान्सक्रिप्ट्स β-ॲक्टिनच्या तुलनेत सामान्यीकृत करण्यात आले आणि २-ΔΔCT पद्धतीचा वापर करून डेटाचे विश्लेषण करण्यात आले. जीन प्रायमर अनुक्रम तक्ता १ मध्ये दर्शविले आहेत.
प्राथमिक माऊस कोलोनिक एपिथेलियल पेशींचे विलगीकरण आणि संवर्धन पूर्वी वर्णन केल्याप्रमाणे केले गेले.²⁰ थोडक्यात, ६-८ आठवड्यांच्या उंदरांना मानेची हाडे मोडून मारल्यानंतर त्यांचे मोठे आतडे (कोलन) प्रथम बाहेर काढण्यात आले, नंतर ते लांबीच्या दिशेने उघडण्यात आले, हँक्स बॅलन्स्ड सॉल्ट सोल्युशन (HBSS, कॅल्शियम आणि मॅग्नेशियमशिवाय) वापरून त्यावर प्रक्रिया करण्यात आली आणि त्याचे ०.५-१ मिमीचे लहान तुकडे करण्यात आले. त्यानंतर, ऊतींना मुक्त DMEM माध्यमात ०.४ मिग्रॅ/मिली कोलाजेनेज XI (सिग्मा, पूल, यूके) वापरून पचवण्यात आले आणि खोलीच्या तापमानावर ५ मिनिटांसाठी ३०० xg वर सेंट्रीफ्यूज करण्यात आले. गोळा झालेला गाळ (पेलेट) ३७°C तापमानावर DMEM माध्यमात (१०% फेटल बोवाइन सीरम, १०० युनिट्स/मिली पेनिसिलीन आणि १०० µg/मिली स्ट्रेप्टोमायसिनसह) पुन्हा विरघळवून नायलॉनच्या जाळीतून (छिद्राचा आकार ~२५० µm) गाळण्यात आला. कोलोनिक एपिथेलियल पेशींचे भाग काचेच्या तळाच्या डिशमध्ये ठेवण्यात आले आणि ॲसेटिक ॲसिड, प्रोपिओनिक ॲसिड, ब्युटीरिक ॲसिड आणि माऊस (माऊस) सोबत उष्मायनात ठेवण्यात आले. 37°C, 5% CO2 वर 2 तासांसाठी विष्ठेचे अर्क.
कोलन ऊती पीबीएस (PBS) सह एकजीव करण्यात आली, आणि ल्युमिनेक्स एलिसा (ELISA) अ‍ॅसे किट्स (आर अँड डी सिस्टीम्स, मिनियापोलिस, एमएन, यूएसए) वापरून कोलन ऊतीमधील सायटोकाइन्स आयएल-६ (IL-6), टीएनएफ-अल्फा (TNF-α) आणि आयएल-१β (IL-1β) ची पातळी तपासण्यात आली. त्याचप्रमाणे, उत्पादकाच्या सूचनांनुसार एलिसा (ELISA) किट (बायोस्वॅम्प, वुहान, चीन) वापरून प्राथमिक मूषक कोलन उपकला पेशींच्या सीरम आणि कल्चर माध्यमातील जीएलपी-१ (GLP-1) ची पातळी निश्चित करण्यात आली.
विष्ठेमधून एकूण डीएनए, डीएनए एक्सट्रॅक्शन किट (टियांगेन, चीन) वापरून काढण्यात आला. डीएनएची गुणवत्ता आणि प्रमाण अनुक्रमे 260 nm/280 nm आणि 260 nm/230 nm या गुणोत्तरांवर मोजण्यात आले. त्यानंतर, प्रत्येक काढलेल्या डीएनएचा टेम्पलेट म्हणून वापर करून, 16S rRNA जनुकाच्या वेगवेगळ्या भागांतील V3-V4 क्षेत्रांना ॲम्प्लिफाय करण्यासाठी विशिष्ट प्रायमर्स 338F (ACTCCTACGGGAGGCAGCAG) आणि 806R (GGACTACHVGGGTWTCTAAT) वापरण्यात आले. पीसीआर उत्पादने QIAquick जेल एक्सट्रॅक्शन किट (QIAGEN, जर्मनी) वापरून शुद्ध करण्यात आली, रिअल-टाइम पीसीआरद्वारे त्यांचे प्रमाण निश्चित करण्यात आले आणि IlluminaMiseq PE300 सिक्वेन्सिंग प्लॅटफॉर्म (Illumina Inc., CA, USA) वापरून त्यांचे सिक्वेन्सिंग करण्यात आले. बायोइन्फॉर्मेटिक्स विश्लेषणासाठी, पूर्वी नोंदवलेल्या प्रोटोकॉलनुसार डेटा प्रोसेसिंग करण्यात आले.21,22 थोडक्यात, रॉ एक्सप्रेस फाइल्स फिल्टर करण्यासाठी Cutadapt (V1.9.1) वापरा. ​​OTUs चे क्लस्टरिंग वापरून करण्यात आले. कायमेरिक अनुक्रम काढून टाकण्यासाठी 97% च्या साम्य कटऑफसह UPARSE (आवृत्ती 7.0.1001) आणि UCHIME वापरण्यात आले. SILVA रायबोसोमल RNA जीन डेटाबेसवर आधारित RDP क्लासिफायर (http://rdp.cme.msu.edu/) वापरून समुदाय रचना विश्लेषण आणि वर्गीकरण केले गेले.
शॉर्ट-चेन फॅटी ऍसिडस् (ऍसिटिक ऍसिड, प्रोपिओनिक ऍसिड आणि ब्युटीरिक ऍसिड) चे प्रमाण ताओ एट अल. यांनी पूर्वी वर्णन केल्याप्रमाणे, काही सुधारणांसह मोजले गेले.२३ थोडक्यात, १०० मिग्रॅ विष्ठा प्रथम ०.४ मि.ली. डीआयनाइज्ड पाण्यात निलंबित केली गेली, त्यानंतर ०.१ मि.ली. ५०% सल्फ्यूरिक ऍसिड आणि ०.५ मि.ली. २-इथाइलब्युटीरिक ऍसिड (अंतर्गत मानक) टाकले गेले, नंतर एकजीव करून ४°C वर गरम केले गेले. C तापमानावर 15 मिनिटांसाठी 12,000 rpm वेगाने सेंट्रीफ्यूज केले. सुपरनॅटंट 0.5 mL इथरने एक्सट्रॅक्ट करून विश्लेषणासाठी GC मध्ये इंजेक्ट केले. गॅस क्रोमॅटोग्राफी (GC) विश्लेषणासाठी, फ्लेम आयनायझेशन डिटेक्टर (FID) असलेल्या GC-2010 प्लस गॅस क्रोमॅटोग्राफ (शिमाझू, इंक.) चा वापर करून नमुन्यांचे विश्लेषण केले गेले. ZKAT-624 कॉलम, 30 m × 0.53 mm × 0.3 μm (लान्झोऊ झोंगके अंताई ॲनालिटिकल टेक्नॉलॉजी कं, लि., चीन) वापरून विलगीकरण साधले गेले. GC सोल्यूशन सॉफ्टवेअर (शिमाझू, इंक.) वापरून डेटा मिळवला गेला. स्प्लिट रेशो 10:1 होता, कॅरियर गॅस नायट्रोजन होता आणि फ्लो रेट 6 mL/min होता. इंजेक्शन व्हॉल्यूम 1 μL होता. इंजेक्टर आणि डिटेक्टरचे तापमान 300°C होते. ओव्हनचे तापमान 13.5 मिनिटांसाठी 140°C वर ठेवले गेले, नंतर वाढवले ​​गेले. 250°C पर्यंत 120°C/मिनिट या दराने; तापमान 5 मिनिटांसाठी टिकवून ठेवण्यात आले.
डेटा सरासरी ± सरासरीची मानक त्रुटी (SEM) म्हणून सादर केला आहे. डेटाचे महत्त्व वन-वे ॲनोव्हा (one-way ANOVA) आणि त्यानंतर डंकनच्या मल्टिपल रेंज टेस्टद्वारे (Duncan's multiple range test) तपासले गेले. सर्व गणनांसाठी ग्राफपॅड प्रिझम ५.० सॉफ्टवेअर (GraphPad Software Inc., सॅन दिएगो, सीए, यूएसए) वापरले गेले आणि p < ०.०५ हे सांख्यिकीयदृष्ट्या महत्त्वपूर्ण मानले गेले.
हे सर्वज्ञात आहे की UC हा एक जुनाट, पुन्हा पुन्हा होणारा कोलायटिसचा आजार आहे, ज्यामध्ये तीव्र पोटदुखी, अतिसार आणि रक्तस्त्राव होतो. त्यामुळे, BLG च्या कोलायटिस-विरोधी परिणामकारकतेचे मूल्यांकन करण्यासाठी उंदरांमध्ये DSS-प्रेरित जुनाट, पुन्हा पुन्हा होणारा कोलायटिस निर्माण करण्यात आला (आकृती 1A). नियंत्रण गटाच्या तुलनेत, DSS मॉडेल गटातील उंदरांचे शरीराचे वजन लक्षणीयरीत्या कमी झाले होते आणि DAI जास्त होता, आणि BLG उपचाराच्या 24 दिवसांनंतर हे बदल लक्षणीयरीत्या पूर्ववत झाले (आकृती 1B आणि C). मोठ्या आतड्याची लांबी कमी होणे हे UC चे एक महत्त्वाचे वैशिष्ट्य आहे. आकृती 1D आणि E मध्ये दाखवल्याप्रमाणे, ज्या उंदरांना DSS देण्यात आले होते त्यांच्या मोठ्या आतड्याची लांबी लक्षणीयरीत्या कमी झाली होती, परंतु BLG उपचाराने ती पूर्ववत झाली. त्यानंतर, मोठ्या आतड्यातील दाह तपासण्यासाठी ऊतकवैज्ञानिक विश्लेषण (histopathological analysis) करण्यात आले. H&E रंगाने रंगवलेल्या प्रतिमा आणि रोगवैज्ञानिक गुणांकांवरून असे दिसून आले की DSS च्या सेवनाने मोठ्या आतड्याची रचना लक्षणीयरीत्या विस्कळीत झाली आणि क्रिप्टचा नाश झाला, तर BLG उपचाराने क्रिप्टचा नाश आणि रोगवैज्ञानिक गुणांक लक्षणीयरीत्या कमी झाले (आकृती 1F आणि G). विशेष म्हणजे, BLG चा संरक्षणात्मक प्रभाव... १ ग्रॅम/किलोचा डोस हा २०० मिग्रॅ/किलोच्या SASP डोसच्या परिणामाशी तुलनात्मक होता. एकत्रितपणे, हे निष्कर्ष सूचित करतात की उंदरांमध्ये DSS-प्रेरित क्रॉनिक रिलॅप्सिंग कोलायटिसची तीव्रता कमी करण्यासाठी BLG प्रभावी आहे.
TNF-α, IL-1β आणि IL-6 हे मोठ्या आतड्याच्या दाहाचे महत्त्वाचे सूचक आहेत. आकृती 2A मध्ये दाखवल्याप्रमाणे, नियंत्रण गटाच्या तुलनेत DSS मुळे मोठ्या आतड्यात TNF-α, IL-1β आणि IL-6 च्या जीन अभिव्यक्तीमध्ये लक्षणीय वाढ झाली. BLG च्या सेवनाने DSS-मुळे होणारे हे बदल लक्षणीयरीत्या पूर्ववत करता येतात. पुढे, आम्ही मोठ्या आतड्याच्या ऊतींमधील दाहक सायटोकाइन्स TNF-α, IL-1β आणि IL-6 ची पातळी निश्चित करण्यासाठी ELISA चा वापर केला. निकालांवरून असेही दिसून आले की DSS ने उपचार केलेल्या उंदरांमध्ये मोठ्या आतड्यातील TNF-α, IL-1β आणि IL-6 ची पातळी लक्षणीयरीत्या वाढली होती, तर BLG उपचाराने ही वाढ कमी केली (आकृती 2B).
आकृती २: BLG हे DSS-उपचारित उंदरांच्या मोठ्या आतड्यात (कोलनमध्ये) TNF-α, IL-1β आणि IL-6 या दाहक सायटोकाइन्सच्या जनुकीय अभिव्यक्ती आणि उत्पादनास प्रतिबंध करते. (A) मोठ्या आतड्यातील TNF-α, IL-1β आणि IL-6 ची जनुकीय अभिव्यक्ती; (B) मोठ्या आतड्यातील TNF-α, IL-1β आणि IL-6 ची प्रथिन पातळी. आकडेवारी सरासरी ± SEM (n = ४-६) म्हणून सादर केली आहे. #p < ०.०५ किंवा ##p < ०.०१ किंवा ###p < ०.००१ विरुद्ध नियंत्रण (Con) गट; *p < ०.०५ किंवा **p < ०.०१ विरुद्ध DSS गट.
अल्सरेटिव्ह कोलायटिसच्या (UC) रोगजननामध्ये आतड्यांमधील सूक्ष्मजीवांचे असंतुलन (intestinal dysbiosis) महत्त्वपूर्ण आहे.²⁴ BLG हे DSS-उपचारित उंदरांच्या आतड्यांतील सूक्ष्मजीवांवर परिणाम करते की नाही हे तपासण्यासाठी, आतड्यांमधील घटकांच्या जिवाणू समुदायाचे विश्लेषण करण्याकरिता 16S rRNA अनुक्रमण (sequencing) करण्यात आले. वेन आकृती (Venn diagram) दर्शवते की तिन्ही गटांमध्ये 385 OTUs समान आहेत. त्याच वेळी, प्रत्येक गटात अद्वितीय OTUs होते (आकृती 3A). पुढे, आकृती 3B आणि C मध्ये दर्शविलेल्या चाओ1 निर्देशांक (Chao1 index) आणि शॅनन निर्देशांक (Shannon index) यांनी दाखवले की BLG-उपचारित उंदरांमध्ये आतड्यांतील सूक्ष्मजीवांच्या समुदायाची विविधता कमी झाली होती, कारण BLG-उपचारित गटामध्ये शॅनन निर्देशांक लक्षणीयरीत्या कमी झाला होता. तिन्ही गटांमधील क्लस्टरिंग नमुने (clustering patterns) निश्चित करण्यासाठी मुख्य घटक विश्लेषण (PCA) आणि मुख्य समन्वय विश्लेषण (PCoA) वापरण्यात आले आणि त्यांनी दाखवले की BLG उपचारानंतर DSS-उपचारित उंदरांची समुदाय रचना स्पष्टपणे वेगळी झाली होती (आकृती 3D आणि E). या माहितीवरून असे सूचित होते की BLG उपचाराने DSS-प्रेरित कोलायटिस असलेल्या उंदरांच्या समुदाय रचनेवर लक्षणीय परिणाम केला.
आकृती ३ डीएसएस-प्रेरित कोलायटिस असलेल्या उंदरांमध्ये बीएलजी आतड्यातील सूक्ष्मजीवांच्या विविधतेत बदल घडवते. (अ) ओटीयूचा वेन आकृती, (ब) चाओ१ निर्देशांक, (क) शॅननचा समृद्धी निर्देशांक, (ड) ओटीयूचा प्रिन्सिपल कंपोनेंट ॲनालिसिस (पीसीए) स्कोअर प्लॉट, (इ) ओटीयू प्रिन्सिपल कोऑर्डिनेट ॲनालिसिस (पीसीओए) स्कोअर आकृती. डेटा सरासरी ± एसईएम (n = ६) म्हणून सादर केला आहे. **पी < ०.०१ डीएसएस गटाच्या तुलनेत.
विष्ठेतील सूक्ष्मजीवांमध्ये होणारे विशिष्ट बदल तपासण्यासाठी, आम्ही आतड्यातील सूक्ष्मजीवांच्या रचनेचे सर्व वर्गीकरण स्तरांवर विश्लेषण केले. आकृती 4A मध्ये दाखवल्याप्रमाणे, सर्व गटांमधील मुख्य संघ फर्मिक्युट्स (Firmicutes) आणि बॅक्टेरॉइडेट्स (Bacteroidetes) होते, त्यानंतर व्हेरुकोमायक्रोबिया (Verrucomicrobia) होते. नियंत्रण गटातील उंदरांच्या तुलनेत, DSS-उपचारित उंदरांच्या विष्ठेतील सूक्ष्मजीव समुदायांमध्ये फर्मिक्युट्सचे सापेक्ष प्रमाण आणि फर्मिक्युट्स/बॅक्टेरॉइडेट्स गुणोत्तर लक्षणीयरीत्या वाढले होते, आणि BLG उपचारानंतर हे बदल लक्षणीयरीत्या उलटले. विशेषतः, BLG उपचारामुळे DSS-प्रेरित कोलायटिस असलेल्या उंदरांच्या विष्ठेमध्ये व्हेरुकोबॅक्टेरियमचे (Verrucobacterium) सापेक्ष प्रमाण लक्षणीयरीत्या वाढले. घरगुती स्तरावर, विष्ठेतील सूक्ष्मजीव समुदायांमध्ये लॅक्नोस्पिरिएसी (Lachnospiriaceae), मुरिबॅक्युलेसी (Muribaculaceae), अकरमॅन्सिएसी (Akkermansiaceae), रुमिनोकोकेसी (Ruminococcaceae) आणि प्रिव्होटेलेसी ​​(Prevotellaceae) यांचा समावेश होता (आकृती 4B). DSS गटाच्या तुलनेत, BLG च्या कमतरतेमुळे अकरमॅन्सिएसीचे प्रमाण वाढले, परंतु इतर जीवाणूंचे प्रमाण कमी झाले. लॅक्नोस्पिरासी आणि रुमिनोकोकासी. विशेषतः, प्रजाती स्तरावर, विष्ठेतील सूक्ष्मजीवांमध्ये लॅक्नोस्पिरा_NK4A136_ग्रुप, अकरमान्सिया आणि प्रिव्होटेलेसी_UCG-001 यांचा समावेश होता (आकृती 4C). या निष्कर्षाने हे देखील दाखवून दिले की BLG उपचाराने DSS आव्हानाला प्रतिसाद म्हणून सूक्ष्मजीवांचे असंतुलन प्रभावीपणे उलटवले, ज्याचे वैशिष्ट्य म्हणजे युबॅक्टेरियम_झायलॅनोफिलम_ग्रुप, रुमिनोकोकासी_UCG-014, इंटेस्टिनिमोनस आणि ऑसिलीबॅक्टरमध्ये घट आणि अकरमान्सिया व प्रिव्होटेलेसी_UCG-001 मध्ये वाढ.
आकृती ४ बीएलजी डीएसएस-प्रेरित कोलायटिस उंदरांमध्ये आतड्यातील सूक्ष्मजीवांच्या विपुलतेत बदल घडवते. (अ) फायलम स्तरावर आतड्यातील सूक्ष्मजीवांची विपुलता; (ब) फॅमिली स्तरावर आतड्यातील सूक्ष्मजीवांची विपुलता; (क) जीनस स्तरावर आतड्यातील सूक्ष्मजीवांची विपुलता. डेटा सरासरी ± एसईएम (n = 6) म्हणून सादर केला आहे. #p < 0.05 किंवा ###p < 0.001 विरुद्ध नियंत्रण (Con) गट; *p < 0.05 किंवा **p < 0.01 किंवा ***p < 0.001 विरुद्ध डीएसएस गट.
अकरमान्सिया आणि प्रिव्होटेलेसी_यूसीजी-००१ मध्ये शॉर्ट-चेन फॅटी ऍसिड्स (SCFAs) हे प्रमुख मेटाबोलाइट्स आहेत, तर आतड्याच्या पोकळीत ऍसिटेट, प्रोपिओनेट आणि ब्युटिरेट हे सर्वात मुबलक प्रमाणात आढळणारे SCFAs आहेत, २५-२७ हे लक्षात घेता, आम्ही आमच्या अभ्यासात अजूनही आहोत. आकृती ५ मध्ये दाखवल्याप्रमाणे, DSS-उपचारित गटामध्ये विष्ठेतील ऍसिटेट, प्रोपिओनेट आणि ब्युटिरेटची सांद्रता लक्षणीयरीत्या कमी झाली होती, तर BLG उपचाराने ही घट मोठ्या प्रमाणात रोखता आली.
आकृती ५. BLG, DSS-प्रेरित कोलायटिस असलेल्या उंदरांच्या विष्ठेतील SCFAs ची पातळी वाढवते. (A) विष्ठेतील ॲसेटिक ॲसिडचे प्रमाण; (B) विष्ठेतील प्रोपिओनिक ॲसिडचे प्रमाण; (C) विष्ठेतील ब्युटीरिक ॲसिडचे प्रमाण. डेटा सरासरी ± SEM (n = 6) म्हणून सादर केला आहे. #p < 0.05 किंवा ##p < 0.01 विरुद्ध नियंत्रण (Con) गट; *p < 0.05 किंवा **p < 0.01 विरुद्ध DSS गट.
आम्ही पुढे प्रजाती-स्तरावरील भिन्न SCFA आणि विष्ठेतील सूक्ष्मजीव यांच्यातील पिअरसन सहसंबंध गुणांकाची गणना केली. आकृती ६ मध्ये दर्शविल्याप्रमाणे, अकरमान्सियाचा प्रोपिओनिक आम्ल (पिअरसन = ०.४८६६) आणि ब्युटीरिक आम्ल (पिअरसन = ०.६१९२) यांच्या उत्पादनाशी सकारात्मक सहसंबंध होता. याउलट, एंटरोमोनस आणि ऑसिलोबॅक्टर या दोन्हींचा ॲसिटेट उत्पादनाशी नकारात्मक संबंध होता, ज्यांचे पिअरसन गुणांक अनुक्रमे ०.४७०९ आणि ०.५१०४ होते. त्याचप्रमाणे, रुमिनोकोकेसी_UCG-०१४ चा प्रोपिओनिक आम्ल (पिअरसन = ०.४५०८) आणि ब्युटीरिक आम्ल (पिअरसन = ०.५८४२) यांच्या उत्पादनाशी अनुक्रमे नकारात्मक सहसंबंध होता.
आकृती ६ भिन्न SCFAs आणि मोठ्या आतड्यातील सूक्ष्मजीव यांच्यातील पिअरसन सहसंबंध विश्लेषण. (A) एंटेरोमोनस आणि ऍसिटिक ऍसिड; (B) कनकशन बॅसिलस आणि ऍसिटिक ऍसिड; (C) अकरमान्सिया आणि प्रोपिओनिक ऍसिड; (D) रुमिनोकोकस_UCG-014 आणि प्रोपिओनिक ऍसिड; (E) अकरमान्सिया आणि ब्युटीरिक ऍसिड; (F) रुमिनोकोकस_UCG-014 आणि ब्युटीरिक ऍसिड.
ग्लुकागॉन-लाइक पेप्टाइड-१ (GLP-1) हे प्रोग्लुकागॉन (Gcg) चे एक पेशी-प्रकार-विशिष्ट पोस्ट-ट्रान्सलेशनल उत्पादन आहे, ज्यात दाह-विरोधी गुणधर्म असतात.²⁸ आकृती ७ मध्ये दाखवल्याप्रमाणे, DSS मुळे Gcg mRNA अभिव्यक्तीमध्ये लक्षणीय घट झाली. नियंत्रण गटाच्या तुलनेत, कोलन आणि BLG उपचाराने DSS-प्रेरित Gcg घट लक्षणीयरीत्या उलटवता आली (आकृती ७A). त्याच वेळी, DSS-उपचारित गटामध्ये सीरममधील GLP-1 ची पातळी लक्षणीयरीत्या कमी झाली होती, आणि BLG उपचाराने ही घट मोठ्या प्रमाणात रोखता आली (आकृती ७B). शॉर्ट-चेन फॅटी ऍसिडस् हे जी-प्रोटीन-कपल्ड रिसेप्टर ४३ (GRP43) आणि जी-प्रोटीन-कपल्ड रिसेप्टर ४१ (GRP41) च्या सक्रियतेद्वारे GLP-1 च्या स्रावाला उत्तेजित करू शकत असल्यामुळे, आम्ही कोलायटिस उंदरांच्या कोलनमध्ये GPR41 आणि GRP43 ची देखील तपासणी केली आणि असे आढळले की DSS च्या आव्हानानंतर GRP43 आणि GPR41 ची कोलनमधील mRNA अभिव्यक्ती लक्षणीयरीत्या कमी झाली होती, आणि BLG उपचाराने ती प्रभावीपणे पूर्ववत करता आली. घटते (आकृती 7C आणि D).
आकृती ७ BLG, DSS-उपचारित उंदरांमध्ये सीरम GLP-1 पातळी आणि कोलोनिक Gcg, GPR41 व GRP43 mRNA अभिव्यक्ती वाढवते. (A) कोलोन ऊतींमधील Gcg mRNA अभिव्यक्ती; (B) सीरममधील GLP-1 पातळी; (C) कोलोन ऊतींमधील GPR41 mRNA अभिव्यक्ती; (D) कोलोन ऊतींमधील GPR43 mRNA अभिव्यक्ती. डेटा सरासरी ± SEM (n = ५-६) म्हणून सादर केला आहे. #p < ०.०५ किंवा ##p < ०.०१ नियंत्रण (Con) गटाच्या तुलनेत; *p < ०.०५ DSS गटाच्या तुलनेत.
डीएसएस-उपचारित उंदरांमध्ये बीएलजी उपचारामुळे सीरम जीएलपी-१ पातळी, कोलोनिक जीसीजी एमआरएनए अभिव्यक्ती आणि विष्ठेतील एससीएफए पातळी वाढू शकत असल्याने, आम्ही प्राथमिक माऊस कोलोनिक एपिथेलियल पेशींमधून जीएलपी-१ च्या उत्सर्जनावर ॲसिटेट, प्रोपिओनेट आणि ब्युटिरेट तसेच नियंत्रण (एफ-कॉन), डीएसएस कोलायटिस (एफ-कॉन -डीएसएस) आणि बीएलजी-उपचारित कोलायटिस (एफ-बीएलजी) उंदरांचा अधिक अभ्यास केला. आकृती ८अ मध्ये दाखवल्याप्रमाणे, अनुक्रमे २ एमएम ॲसिटिक ॲसिड, प्रोपिओनिक ॲसिड आणि ब्युटीरिक ॲसिडने उपचार केलेल्या प्राथमिक माऊस कोलोनिक एपिथेलियल पेशींनी जीएलपी-१ चे उत्सर्जन लक्षणीयरीत्या उत्तेजित केले, जे मागील अभ्यासांशी सुसंगत आहे.२९,३० त्याचप्रमाणे, सर्व एफ-कॉन, एफ-डीएसएस आणि एफ-बीएलजी (०.२५ ग्रॅम विष्ठेच्या समतुल्य) यांनी प्राथमिक माऊस कोलोनिक एपिथेलियल पेशींमधून जीएलपी-१ चे उत्सर्जन मोठ्या प्रमाणात उत्तेजित केले. विशेष म्हणजे, एफ-डीएसएस-उपचारित प्राथमिक माऊस कोलोनिक एपिथेलियल पेशींद्वारे उत्सर्जित होणाऱ्या जीएलपी-१ चे प्रमाण एफ-कॉन पेक्षा खूपच कमी होते. आणि F-BLG-उपचारित प्राथमिक माऊस कोलोनिक एपिथेलियल पेशी. (आकृती 8B). या डेटावरून असे सूचित होते की BLG उपचाराने आतड्यातील SCFA-व्युत्पन्न GLP-1 उत्पादन लक्षणीयरीत्या पुनर्संचयित केले.
आकृती ८ बीएलजी-व्युत्पन्न एससीएफए प्राथमिक मूषक बृहदांत्र उपकला पेशींमधून जीएलपी-१ च्या स्रावाला उत्तेजित करते. (अ) ॲसेटिक ॲसिड, प्रोपिओनिक ॲसिड आणि ब्युटीरिक ॲसिडने प्राथमिक मूषक बृहदांत्र उपकला पेशींमधून जीएलपी-१ चा स्राव उत्तेजित केला; (ब) विष्ठेचे अर्क एफ-कॉन, एफ-डीएसएस आणि एफ-बीएलजी यांनी प्राथमिक मूषक बृहदांत्र उपकला पेशींना उत्तेजित केले. स्रावित झालेल्या जीएलपी-१ चे प्रमाण. बृहदांत्र उपकला पेशींचे नमुने काचेच्या तळाच्या पेट्री डिशमध्ये ठेवण्यात आले आणि त्यांना अनुक्रमे २ एमएम ॲसेटिक ॲसिड, प्रोपिओनिक ॲसिड, ब्युटीरिक ॲसिड आणि विष्ठेचे अर्क एफ-कॉन, एफ-डीएसएस, आणि एफ-बीएलजी (०.२५ ग्रॅम विष्ठेच्या समतुल्य) यांच्यासोबत उपचारित करण्यात आले. अनुक्रमे 37°C, 5% CO2 वर 2 तास. प्राथमिक मूषक बृहदांत्र उपकला पेशींमधून मुक्त झालेल्या GLP-1 चे प्रमाण ELISA द्वारे शोधण्यात आले. डेटा सरासरी ± SEM (n = 3) म्हणून सादर केला आहे. #p < 0.05 किंवा ##p < 0.01 विरुद्ध रिक्त किंवा F-Con; *p < 0.05 विरुद्ध F-DSS.
संक्षिप्त रूपे: Ace, ऍसिटिक ऍसिड; Pro, प्रोपिओनिक ऍसिड; however, ब्युटीरिक ऍसिड; F-Con, नियंत्रण गटातील उंदरांच्या विष्ठेचा अर्क; F-DSS, कोलायटिस झालेल्या उंदरांच्या विष्ठेचा अर्क; F-BLG, BLG-उपचारित मोठ्या आतड्यातील दाह झालेल्या उंदरांच्या विष्ठेचा अर्क.
जागतिक आरोग्य संघटनेने एक दुर्धर आजार म्हणून सूचीबद्ध केलेला, अल्सरेटिव्ह कोलायटिस (UC) हा एक जागतिक धोका बनत आहे; तथापि, या रोगाचे भाकीत करणे, प्रतिबंध करणे आणि त्यावर उपचार करण्याच्या प्रभावी पद्धती अजूनही मर्यादित आहेत. त्यामुळे, अल्सरेटिव्ह कोलायटिससाठी (UC) नवीन सुरक्षित आणि प्रभावी उपचारात्मक धोरणे शोधण्याची आणि विकसित करण्याची तातडीची गरज आहे. पारंपारिक चिनी औषधनिर्मिती हा एक आशादायक पर्याय आहे, कारण शतकानुशतके चिनी लोकांमध्ये अल्सरेटिव्ह कोलायटिसच्या उपचारांमध्ये अनेक पारंपारिक चिनी औषधनिर्मिती प्रभावी असल्याचे दिसून आले आहे, आणि ती सर्व जैविक सेंद्रिय आणि नैसर्गिक सामग्री आहेत जी बहुतेक मानव आणि प्राण्यांसाठी निरुपद्रवी आहेत.31,32 या अभ्यासाचा उद्देश अल्सरेटिव्ह कोलायटिसच्या उपचारांसाठी एक सुरक्षित आणि प्रभावी पारंपारिक चिनी औषधनिर्मिती शोधणे आणि त्याच्या कार्यप्रणालीचा शोध घेणे हा होता. बीएलजी (BLG) हे फ्लूवर उपचार करण्यासाठी वापरले जाणारे एक सुप्रसिद्ध चिनी हर्बल मिश्रण आहे.8,33 आमच्या आणि इतरांच्या प्रयोगशाळेतील कामातून असे दिसून आले आहे की इंडिगो, जे बीएलजीच्याच कच्च्या मालापासून बनवलेले एक प्रक्रिया केलेले पारंपारिक चिनी औषध उत्पादन आहे, ते मानव आणि प्राण्यांमध्ये अल्सरेटिव्ह कोलायटिसच्या उपचारांमध्ये लक्षणीय परिणामकारकता दर्शवते.4,34 तथापि, बीएलजीचे कोलायटिस-विरोधी परिणाम आणि त्याच्या परिणामांची कार्यप्रणाली अस्पष्ट आहे. सध्याच्या अभ्यासात, आमचे निष्कर्ष दर्शवतात की बीएलजी डीएसएस-प्रेरित कोलनच्या दाह कमी करण्यास प्रभावीपणे मदत करते, आतड्यातील सूक्ष्मजीवांच्या संतुलनाशी आणि आतड्यातून निर्माण होणाऱ्या GLP-1 उत्पादनाच्या पुनर्संचयनाशी संबंधित आहे.
हे सर्वज्ञात आहे की UC (अल्सरेटिव्ह कोलायटिस) मध्ये वजन कमी होणे, अतिसार, गुदद्वारातून रक्तस्त्राव आणि मोठ्या आतड्याच्या श्लेष्मल त्वचेचे मोठ्या प्रमाणात नुकसान यांसारख्या विशिष्ट क्लिनिकल लक्षणांसह पुन्हा पुन्हा आजाराचा प्रादुर्भाव होतो.35 म्हणून, क्रॉनिक रिलॅप्सिंग कोलायटिसवर उपचार करण्यासाठी, पाच दिवसांसाठी 1.8% DSS चे तीन चक्र दिले गेले आणि त्यानंतर सात दिवस फक्त पाणी पिण्यास दिले गेले. आकृती 1B मध्ये दाखवल्याप्रमाणे, वजनातील चढ-उतार आणि DAI स्कोअरने क्रॉनिक रिलॅप्सिंग कोलायटिस यशस्वीरित्या प्रेरित झाल्याचे दर्शवले. BLG ने उपचार केलेल्या गटातील उंदरांमध्ये आठव्या दिवसापासून सुधारणा दिसून आली, जी चोविसाव्या दिवसापेक्षा लक्षणीयरीत्या वेगळी होती. DAI स्कोअरमध्येही असेच बदल दिसून आले, जे कोलायटिसच्या क्लिनिकल स्थितीत सुधारणा झाल्याचे सूचित करतात. मोठ्या आतड्याला झालेली इजा आणि दाहक स्थितीच्या बाबतीत, BLG उपचारानंतर मोठ्या आतड्याची लांबी, मोठ्या आतड्याच्या ऊतींचे नुकसान आणि मोठ्या आतड्याच्या ऊतींमधील दाहक सायटोकाइन्स TNF-α, IL-1β, आणि IL-6 यांची जनुकीय अभिव्यक्ती आणि उत्पादन यातही मोठी सुधारणा झाली. एकत्रितपणे, हे परिणाम स्पष्टपणे दर्शवतात की BLG क्रॉनिक रिलॅप्सिंगच्या उपचारात प्रभावी आहे. उंदरांमध्ये कोलायटिस.
बीएलजी (BLG) आपले औषधीय परिणाम कसे घडवून आणते? अनेक पूर्वीच्या अभ्यासांनी दाखवले आहे की आतड्यातील सूक्ष्मजीवसमूह (gut microbiota) अल्सरेटिव्ह कोलायटिसच्या (UC) रोगजननामध्ये महत्त्वाची भूमिका बजावतो, आणि मायक्रोबायोम-आधारित व मायक्रोबायोम-लक्ष्यित उपचारपद्धती अल्सरेटिव्ह कोलायटिसच्या उपचारांसाठी एक अत्यंत आकर्षक धोरण म्हणून उदयास आल्या आहेत. प्रस्तुत अभ्यासात, आम्ही दाखवून दिले की बीएलजी उपचारामुळे आतड्यातील सूक्ष्मजीवसमूहाच्या रचनेत लक्षणीय बदल झाले, जे सूचित करते की डीएसएस-प्रेरित कोलायटिसविरुद्ध बीएलजीचा संरक्षणात्मक प्रभाव हा आतड्यातील सूक्ष्मजीवसमूहाच्या नियमनाशी संबंधित आहे. हे निरीक्षण या कल्पनेशी सुसंगत आहे की आतड्यातील सूक्ष्मजीवसमूहाच्या होमियोस्टॅसिसचे पुनर्प्रोग्रामिंग करणे हा पारंपारिक चिनी औषध (TCM) तयारीची परिणामकारकता समजून घेण्यासाठी एक महत्त्वाचा दृष्टिकोन आहे.३६,३७ विशेष म्हणजे, अकरमान्सिया (Akkermansia) हा एक ग्रॅम-निगेटिव्ह आणि पूर्णपणे विनॉक्सिजीवी जीवाणू आहे जो आतड्याच्या श्लेष्मल थरात राहतो, जो म्युसिन्सचे विघटन करतो, प्रोपिओनिक आम्ल तयार करतो, गोब्लेट पेशींच्या विभेदनाला उत्तेजित करतो आणि श्लेष्मल त्वचेची देखभाल करतो. अडथळ्याच्या अखंडतेचे कार्य.26 अनेक क्लिनिकल आणि प्राण्यांवरील डेटा असे सूचित करतात की अकरमान्सिया निरोगी श्लेष्मल त्वचेशी अत्यंत संबंधित आहे,38 आणि अकरमान्सिया प्रजातींचे तोंडी सेवन. श्लेष्मल दाह लक्षणीयरीत्या सुधारू शकतो.३९ आमचा सध्याचा डेटा सूचित करतो की बीएलजी उपचारानंतर अकरमान्सियाचे सापेक्ष प्रमाण लक्षणीयरीत्या वाढते. याव्यतिरिक्त, प्रिव्होटेलेसी_यूसीजी-००१ हा एससीएफए-उत्पादक जीवाणू आहे.२७ अनेक अभ्यासांमध्ये असे दिसून आले आहे की कोलायटिस असलेल्या प्राण्यांच्या विष्ठेमध्ये प्रिव्होटेलेसी_यूसीजी-००१ कमी सापेक्ष प्रमाणात आढळला.४०,४१ आमचा सध्याचा डेटा असेही दर्शवितो की बीएलजी उपचारामुळे डीएसएस-उपचारित उंदरांच्या कोलनमध्ये प्रिव्होटेलेसी_यूसीजी-००१ चे सापेक्ष प्रमाण लक्षणीयरीत्या वाढू शकते. याउलट, ऑसिलीबॅक्टर हा एक मेसोफिलिक, पूर्णपणे अवायुजीवी जीवाणू आहे.४२ असे नोंदवले गेले आहे की यूसी उंदरांमध्ये ऑसिलीबॅक्टरचे सापेक्ष प्रमाण लक्षणीयरीत्या वाढले होते आणि ते आयएल-६ आणि आयएल-१β पातळी आणि पॅथॉलॉजिकल स्कोअरशी लक्षणीयरीत्या सकारात्मक सहसंबंधित होते.४३,४४ विशेष म्हणजे, बीएलजी उपचारामुळे डीएसएस-उपचारित उंदरांच्या विष्ठेमध्ये ऑसिलीबॅक्टरचे सापेक्ष प्रमाण लक्षणीयरीत्या कमी झाले. विशेष म्हणजे, हे BLG-मुळे बदललेले जिवाणू हे सर्वाधिक SCFA-उत्पादक जिवाणू होते. अनेक पूर्वीच्या अभ्यासांनी मोठ्या आतड्याच्या दाह आणि आतड्याच्या उपकला अखंडतेच्या संरक्षणावर SCFA चे संभाव्य फायदेशीर परिणाम दर्शविले आहेत.४५,४६ आमच्या सध्याच्या डेटामध्ये असेही दिसून आले की, BLG-उपचारित उंदरांमध्ये DSS-उपचारित विष्ठेतील SCFA ॲसिटेट, प्रोपिओनेट आणि ब्युटिरेटचे प्रमाण मोठ्या प्रमाणात वाढले होते. एकंदरीत, हे निष्कर्ष स्पष्टपणे दर्शवतात की BLG उपचार क्रॉनिक रिलॅप्सिंग कोलायटिस असलेल्या उंदरांमध्ये DSS-प्रेरित SCFA-उत्पादक जिवाणूंना प्रभावीपणे वाढवू शकतात.
GLP-1 हे एक इन्क्रेटीन आहे जे प्रामुख्याने इलियम आणि कोलनमध्ये तयार होते आणि पोटातील अन्न रिकामे होण्याची प्रक्रिया मंदावण्यामध्ये आणि जेवणानंतर रक्तातील ग्लुकोजची पातळी कमी करण्यामध्ये महत्त्वाची भूमिका बजावते.47 पुरावे सूचित करतात की डायपेप्टिडिल पेप्टिडेस (DPP)-4, एक GLP-1 रिसेप्टर ॲगोनिस्ट, आणि एक GLP-1 नॅनोमेडिसिन उंदरांमधील आतड्यांची जळजळ प्रभावीपणे कमी करू शकतात.48-51 मागील अभ्यासांमध्ये नोंदवल्याप्रमाणे, SCFA ची उच्च सांद्रता मानवांमध्ये आणि उंदरांमध्ये प्लाझ्मा GLP-1 पातळीशी संबंधित होती.52 आमचा सध्याचा डेटा दर्शवितो की BLG उपचारानंतर, सीरम GLP-1 पातळी आणि Gcg mRNA अभिव्यक्ती लक्षणीयरीत्या वाढली. त्याचप्रमाणे, DSS-उपचारित कोलायटिस उंदरांच्या विष्ठेच्या अर्काद्वारे उत्तेजित करण्याच्या तुलनेत, BLG-उपचारित कोलायटिस उंदरांच्या विष्ठेच्या अर्काद्वारे उत्तेजित केल्यानंतर कोलनिक कल्चरमध्ये GLP-1 स्राव लक्षणीयरीत्या वाढला. SCFAs GLP-1 च्या स्रावावर कसा परिणाम करतात? ग्वेन टोलहर्स्ट आणि इतर. अहवालानुसार SCFA हे GRP43 आणि GPR41 द्वारे GLP-1 स्रावाला उत्तेजित करू शकते.²⁹ आमचा सध्याचा डेटा असेही दर्शवितो की BLG उपचारामुळे DSS-उपचारित उंदरांच्या कोलनमध्ये GRP43 आणि GPR41 ची mRNA अभिव्यक्ती लक्षणीयरीत्या वाढते. हा डेटा सूचित करतो की BLG उपचार GRP43 आणि GPR41 ला सक्रिय करून SCFA-प्रवर्तित GLP-1 उत्पादन पुनर्संचयित करू शकतो.
बीएलजी हे चीनमध्ये दीर्घकाळासाठी डॉक्टरांच्या चिठ्ठीशिवाय (OTC) मिळणारे औषध आहे. कुनमिंग उंदरांमध्ये बीएलजीचा कमाल सहनशील डोस ८० ग्रॅम/किलो आहे आणि कोणतीही तीव्र विषबाधा दिसून आलेली नाही.५३ सध्या, मानवांसाठी बीएलजीचा (साखरेशिवाय) शिफारस केलेला डोस ९-१५ ग्रॅम/दिवस (दिवसातून ३ वेळा) आहे. आमच्या अभ्यासात असे दिसून आले की १ ग्रॅम/किलो बीएलजीने उंदरांमध्ये डीएसएस-प्रेरित क्रॉनिक रिलॅप्सिंग कोलायटिसमध्ये सुधारणा केली. हा डोस वैद्यकीयदृष्ट्या वापरल्या जाणाऱ्या बीएलजीच्या डोसच्या जवळ आहे. आमच्या अभ्यासात असेही आढळले की, त्याची कार्यप्रणाली, किमान अंशतः, आतड्यातील सूक्ष्मजीवांमध्ये, विशेषतः एससीएफए-उत्पादक जीवाणू, जसे की अकरमान्सिया आणि प्रिव्होटेलेसी_यूसीजी-००१, यांच्यातील बदलांद्वारे मध्यस्थी केली जाते, जेणेकरून आतड्यातून निर्माण होणारे जीएलपी-१ उत्पादन पुनर्संचयित करता येईल. हे निष्कर्ष सूचित करतात की वैद्यकीय कोलायटिस उपचारांसाठी एक संभाव्य उपचारात्मक घटक म्हणून बीएलजीचा अधिक विचार केला पाहिजे. तथापि, ते आतड्यातील सूक्ष्मजीवांना नेमके कोणत्या यंत्रणेद्वारे नियंत्रित करते, हे सूक्ष्मजीव-कमतरता असलेल्या उंदरांद्वारे आणि मल जीवाणू प्रत्यारोपणाद्वारे निश्चित करणे बाकी आहे.
Ace, ऍसिटिक ऍसिड; but, ब्युटीरिक ऍसिड; BLG, पांडन; DSS, डेक्स्ट्रान सोडियम सल्फेट; DAI, डिसीज ऍक्टिव्हिटी इंडेक्स; DPP, डायपेप्टिडिल पेप्टिडेस; FID, फ्लेम आयनायझेशन डिटेक्टर; F-Con, कंट्रोल; उंदरांचे विष्ठेचे अर्क; F-DSS, DSS कोलायटिस असलेल्या उंदरांचे विष्ठेचे अर्क; F-BLG, BLG-उपचारित कोलायटिस असलेल्या उंदरांचे विष्ठेचे अर्क; GLP-1, ग्लुकागॉन-लाइक पेप्टाइड-1; Gcg, ग्लुकागॉन; gas chromatography, गॅस क्रोमॅटोग्राफी; GRP43, जी प्रोटीन-कपल्ड रिसेप्टर 43; GRP41, जी प्रोटीन-कपल्ड रिसेप्टर 41; H&E, हेमेटोक्सिलिन-इओसिन; HBSS, हँक्स बॅलन्स्ड सॉल्ट सोल्युशन; OTC, OTC; PCA, प्रिन्सिपल कंपोनेंट ॲनालिसिस; PCoA, प्रिन्सिपल कोऑर्डिनेट ॲनालिसिस; Pro, प्रोपिओनिक ऍसिड; SASP, सल्फासालाझिन; SCFA, शॉर्ट-चेन फॅटी ॲसिड्स; चायनीज मेडिसिन, पारंपरिक चीनी औषध; UC, अल्सरेटिव्ह कोलायटिस.
सर्व प्रायोगिक प्रोटोकॉलला पेकिंग युनिव्हर्सिटी शेन्झेन-हाँगकाँग युनिव्हर्सिटी ऑफ सायन्स अँड टेक्नॉलॉजी मेडिकल सेंटर (शेन्झेन, चीन) च्या प्राणी नीती समितीने संस्थात्मक मार्गदर्शक तत्त्वे आणि प्राणी नियमांनुसार (नीती क्रमांक A2020157) मान्यता दिली होती.
सर्व लेखकांनी संकल्पना आणि रचना, डेटा संपादन किंवा डेटा विश्लेषण आणि अर्थ लावणे यामध्ये महत्त्वपूर्ण योगदान दिले; लेखाचा मसुदा तयार करण्यात किंवा महत्त्वाच्या बौद्धिक सामग्रीचे चिकित्सकपणे पुनरावलोकन करण्यात भाग घेतला; प्रस्तुत जर्नलमध्ये हस्तलिखित सादर करण्यास सहमती दर्शविली; प्रकाशनासाठीच्या आवृत्तीला अंतिम मंजुरी दिली; कामाच्या सर्व पैलूंसाठी जबाबदार.
या कामाला चीनच्या राष्ट्रीय नैसर्गिक विज्ञान प्रतिष्ठान (81560676 आणि 81660479), शेन्झेन विद्यापीठाचा प्रथम-श्रेणी प्रकल्प (86000000210), शेन्झेन विज्ञान आणि तंत्रज्ञान नवोपक्रम समिती निधी (JCYJ20210324093810026), आणि ग्वांगडोंग प्रांतीय वैद्यकीय विज्ञान आणि तंत्रज्ञान संशोधन निधी (A2020157 आणि A2020272), गुइझोउ वैद्यकीय विद्यापीठ फार्मसी गुइझोउ प्रांताद्वारे निधीपुरवठा केलेली प्रमुख प्रयोगशाळा (YWZJ2020-01) आणि पेकिंग विद्यापीठ शेन्झेन रुग्णालय (JCYJ2018009) यांनी पाठिंबा दिला.
१. टँग बी, झू जे, झांग बी, इत्यादी. उंदरांमध्ये डेक्स्ट्रान सोडियम सल्फेट-प्रेरित प्रायोगिक कोलायटिसमध्ये दाहशामक घटक म्हणून ट्रिप्टोलाइडची उपचारात्मक क्षमता. प्री-इम्यून. २०२०;११:५९२०८४. doi: १०.३३८९/fimmu.२०२०.५९२०८४
२. कॅप्लान जीजी. आयबीडीचा जागतिक भार: २०१५ ते २०२५ पर्यंत. नॅट रिव्ह्यू गॅस्ट्रोएन्टेरोलॉजी हेपॅटोलॉजी. २०१५; १२:७२०–७२७. doi: 10.1038/nrgastro.2015.150
३. पेंग जे, झेंग टीटी, ली शुए, इत्यादी. वनस्पतींपासून मिळणारे अल्कलॉइड्स: दाहक आतडी रोगातील आशादायक रोग सुधारक. प्रीफार्माकोलॉजी. २०१९;१०:३५१. doi:१०.३३८९/fphar.२०१९.००३५१
४. शाओ हायटेंग, पेंग जी, वेन बी, आणि इतर. इंडिगो नॅचुरॅलिस उंदरांमध्ये DSS-प्रेरित कोलायटिसमध्ये मोठ्या आतड्यातील ऑक्सिडेटिव्ह ताण आणि Th1/Th17 प्रतिसाद रोखते. ऑक्सिड मेड सेल लॉंजेव्ह. २०१९;२०१९:९४८०९४५. doi: १०.११५५/२०१९/९४८०९४५
५. चेन एम, डिंग वाय, टोंग झेड. अल्सरेटिव्ह कोलायटिसच्या उपचारात सोफोरा फ्लॅवेसेन्स (Sophora flavescens) या चिनी औषधी वनस्पतीची परिणामकारकता आणि सुरक्षितता: नैदानिक ​​पुरावे आणि संभाव्य कार्यप्रणाली. प्रीफार्माकोलॉजी. २०२०;११:६०३४७६. doi:१०.३३८९/fphar.२०२०.६०३४७६
६. काओ फांग, लिऊ जी, शा बेनशिंग, पॅन एचएफ. नैसर्गिक उत्पादने: दाहक आतडी रोगांच्या उपचारांसाठी प्रायोगिकरित्या प्रभावी औषधे. करंट फार्मास्युटिकल्स. २०१९; २५:४८९३–४९१३. doi: १०.२१७४/१३८१६१२८२५६६६१९१२१६१५४२२४
७. झांग सी, जियांग एम, लू ए. पारंपरिक चिनी औषधांनी अल्सरेटिव्ह कोलायटिसच्या सहायक उपचारांवरील चिंतन. क्लिनिकल रिव्ह्यू ॲलर्जी इम्युनायझेशन. २०१३;४४:२७४–२८३. doi: 10.1007/s12016-012-8328-9
८. ली झोंगटेंग, ली ली, चेन टीटी, इत्यादी. हंगामी इन्फ्लूएंझाच्या उपचारात बॅनलांगेन ग्रॅन्युल्सची परिणामकारकता आणि सुरक्षितता: एका यादृच्छिक नियंत्रित चाचणीसाठी अभ्यास प्रोटोकॉल. ट्रायल. २०१५; १६:१२६. doi: १०.११८६/s१३०६३-०१५-०६४५-x